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AFA超声助力蛋白提取,得率高活性好结构更完整!

版权所有,转载请联系基因市场部
2019-11-07

      样本制备是从样本收集到实验结果分析之间的重要步骤, 样本制备质量即影响下游生物大分子能否充分释放,又影响生物大分子是否保持好的生物活性等,这些都会直接影响实验结果及分析的准确性。蛋白质分析是生命科学的重要课题之一,然而,要想获得优质的蛋白质样本并不容易。

AFA助力样本制备

 Covaris 专利自动聚焦声波技术(Adaptive Focused Acoustics,AFA)越来越多被用于从各类样本中分离蛋白质和其他生物标志物。AFA技术以其可重现性、非接触性和等温处理聚焦声波技术特点,可以帮助从各类组织和细胞中获得高完整性且保持生物活性的蛋白质样品,并提高蛋白质产量。

AFA样本制备优势

简单操作流程规范化样品制备,可高通量自动化

微米级破碎,显著提高得率

可处理多种样本类型,保留样本异质性

低温高效,保护生物大分子完整性

高度可重复性,与下游分析方法兼容


1.从FFPE样品中提取蛋白质

FFPE样本是临床样本的最大来源之一。传统上,由于低效、不完全的石蜡去除和解交联,FFPE样本一直存在蛋白质回收效率差、重复性差、速度慢等问题。Covaris AFA技术和Protifi™s-™的独特组合可在单管单柱中快速简便高效的提取FFPE样本蛋白质,提高蛋白质得率和获得的蛋白质种类数,同时具有高度可重复性,无需有毒有机溶剂,此外也易于高通量扩展。

Fig.1  SDS/AFA/S-Trap workflow for FFPE samples

Fig.2  AFA+5%SDS+Protifi S-Trap蛋白提取方法与研磨珠提取得到的蛋白质种类比较,样本为肾脏FFPE样本。

从上图可以看出使用5%SDS +研磨珠+Protifi S-Trap提取肾脏FFPE样本得到581种蛋白,而采用AFA+5%SDS+Protifi S-Trap蛋白提取方法则鉴定出2508种蛋白,远远高于采用研磨珠的方法。

2. AFA 提取保留蛋白完整性

     许多已发表文章都认可了AFA技术提取能帮助蛋白质保持在自然状态,保留蛋白完整性。这对于研究翻译后修饰(PTMS),如磷酸化、泛素化或蛋白活性测定非常有帮助。

Fig.3 自动聚焦超声(AFA)、探头超声、珠子研磨(minimum&maximum speed)裂解酵母菌液,得到的蛋白样品,使用2-DE双向电泳分析。

2-DE结果显示使用AFA处理的蛋白样本中保留了更多高分子量蛋白。

因此,Covaris自适性聚焦超声(AFA)技术应用于蛋白提取,最大限度保证总蛋白的得率和活性,保护高分子量蛋白的结构完整性,保留蛋白质的泛素化、磷酸化等修饰位点。

3. AFA可以进行低起始量提取

在蛋白质研究当中,常遇到低起始量(细胞数<10,000))。AFA提供的精确可控聚焦声波技术提高了细胞裂解效率,帮助高效从低起始量样本中提取蛋白质、RNA、DNA、代谢物或其他目的产物。

Fig.4 2000个细胞分别用In-solution、On-tip、AFA技术和10^7个细胞使用常规裂解方法提取获得的匀浆产物,上样其中500个细胞的蛋白产物进行PLOT-LC-MS串联质谱鉴定的结果(n=3),细胞为MCF-7细胞。

从上图中可以看出,AFA方法处理2000个细胞所得的蛋白质种类远远高于其他两种常规方法,同时经AFA处理后,即使2000个细胞所得的蛋白质种类与常规裂解方法处理1X10^7个细胞所得蛋白质种类相当。

4. AFA可处理难裂解样本

AFA超声技术已被证明对多种样本的裂解是有效的:植物、细菌、酵母或肌肉等坚硬的哺乳动物组织已经成功地用聚焦超声处理过。


Covaris 为您提供完整优化的蛋白质提取解决方案

Covaris针对不同的下游实验,开发出不同的protein extraction buffer。无论是天然蛋白还是变性蛋白,从仪器到试剂给您一个完整优化的蛋白质提取方案。

Fig.5 Covaris蛋白提取buffer选择表

Covaris truXTRAC Proteins-Tissue Lysis Buffer(520284)适用于FFPE样本、新鲜/冷冻组织、细胞等样本类型的蛋白提取。

基因有限公司作为Covaris公司中国区独家代理商,为您提供最完整的DNA 片段化、ChIP实验、FFPE样本核酸提取、蛋白提取解决方案等。基因有限公司的宗旨是“专才为专家服务”,有专业团队为各大科研机构提供安装培训,技术支持,应用培训与售后维护一条龙服务,赢得客户的一致好评与信任。想要了解更多,请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司员工。


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